Реферат: Лабораторные работы диагностики - анализ мочи и крови

ЯрославскаяГосударственная Медицинская Академия

Кафедрапропедевтики внутренних болезней педиатрического факультета

Учебно-методическое пособиедля студентов III курса педиатрического факультета

Лабораторныеметоды диагностики

( часть первая)

ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВИ

Ярославль,1997

Цель занятия:

Овладениестудентами методикой общего клинического анализа крови и клинической оценкойполученных данных.

Порядок исследования:

Морфологическое исследование крови состоит из:

- определения количества гемоглобина,

- определения количества эритроцитов и

- лейкоцитов в 1 ммЗ крови,

- подсчета лейкоцитарной формулы,

- цветового показателя, а также

— определения скорости оседания эритроцитов(СОЭ).

Режеприсоединяют подсчет ретикулоцитов, тромбоцитов.

Дляморфологического исследования достаточно того количества крови, которое можнополучить из укола в палец.

Техника взятия крови

Исследованиякрови следует всегда производить в одно тоже время при одинаковых условиях, доприема пищи. Кровь берут из IV пальца левой руки. Перед уколом палецдезинфицируют и обезжиривают, протирая его ватой, смоченной спиртом, а затем

эфиромили их смесью. Прокол производят либо стерилизованным скарификатором, либоиглой Франка со сменными стерилизуемыми лезвиями. Укол обычно производится вверхушку мякоти первой фаланги на глубину 2,5 — 3 мм. Полученную после уколапервую каплю снимают фильтровальной бумагой или ватой, смоченной эфиром. Кровьдля исследования берут в определенном порядке: для

определенияСОЭ, гемоглобина, затем — для подсчета лейкоцитов и эритроцитов; делают мазки.После взятия крови, мякоть пальца оборачивается смоченной эфиром или спиртомватой и прижимается к ладони для того, чтобы остановить кровотечение.

Определение скорости оседания эритроцитов(СОЭ)

Оборудование и реактивы:

1.Аппарат Панченкова.

2.Капилляры Панченкова.

3.5% раствор лимоннокислого натрия (свежеприготовленный).

4.Часовое стекло.

5. Игла Франка или скарификатор.

6. Вата.

7. Спирт.

Аппарат Панченкова состоит из штатива скапиллярами (12 шт.) шириной 1 мм, на стенке которых нанесены деления от 0 (сверху) до 100 (снизу). На уровне 0 имеетсябуква К (кровь), а на середине пипетки, около метки 50 — буква Р (реактив).

Ход исследования:

Вкапилляр Панченкова набирают 5% раствор лимоннокислого натрия до метки 50(буква Р) и выдувают на часовое стекло. Из укола пальца, держа капилляргоризонтально, набирают кровь до метки 0 (Буква К). Затем выдувают кровь начасовое стекло с лимоннокислым натрием, после чего вторично набирают кровь дометки 0 и выпускают дополнительно к первой порции.

Следовательно,на часовом стеклышке имеется соотношение цитрата и крови, равное 1:4, т. е.четыре объема крови в один объем реактива. Перемешивают кровь концом капилляра,набирают ее до метки 0 и ставят в аппарат Панченкова строго вертикально. Черезчас отмечают число миллиметров столбика плазмы.

Оценка полученных данных:

В норме СОЭ равна для мужчин 4-10 мм, дляженщин 4-15 мм в час.

Определение содержания гемоглобина

Оборудование и реактивы:

1.Гемометр Сали.

2.Пипетка от гемометра Сали.

3.0,1 N HCI.

4.Дистиллированная вода.

5.Пипетка.

6.Стеклянная палочка.

7.Игла Франка или скарификатор.

Дляколичественного определения гемоглобина пользуются обычно колориметрическимспособом. Принцип определения заключается в превращении гемоглобина крови всолянокислый гематин и сравнении цвета полученного с имеющимся в приборестандартом. Прибором для определения служит гемометр Сали. Он состоит из двухзапаянных

пробироксо стандартной цветной жидкостью 1% раствор солянокислого гематина вглицерине), содержащей 16,67 г% гемоглобина (16,67 г на 100 мл крови). Между ними расположена градуированнаяпробирка, имеющая две шкалы. Одна — сделениями от 0 до 23 служит для определения гемоглобина в граммах на 100 млкрови, т. е. в грамм процентах; другая шкала с делениями от 0 до 140 показываетединицы гемоглобина (процент гемоглобина).

Ход исследования:

Вградуированную пробирку, находящуюся в среднем прорезе, наливают до началашкалы 0,1N раствор соляной кислоты. Затем из места укола на мякоти пальцапипеткой Сали набирают кровь до метки 0,02 мл (20 мм3), насасывая ее ртом черезнадетую на верхний конец пипетки резиновую трубочку со стеклянным мундштуком.Кончик пипетки обтирают от крови и опускают в пробирку с соляной кислотой,осторожно выдувая содержимое, чтобы не образовались пузырьки воздуха. Ударяяпальцем по нижней части пробирки, тщательно размешивают кровь и оставляют ее на5 мин. для образования солянокислого гематина. За это время набирают кровь дляостальной части анализа. По истечении этого времени приливают в пробирку покаплям дистиллированную воду, размешивая стеклянной палочкой до тех пор, покацвет раствора исследуемой крови полностью сравняется с цветом стандартнойжидкости. Отмечают, на каком делении находится в градуированной пробирке нижниймениск раствора крови, показывающий содержание гемоглобина в г% или единицах(процентах).

Оценка полученных данных:

Внорме содержание гемоглобина в грамм-процентах у мужчин колеблется от 13,3 до18 г%, у женщин — от 11,7 до 15,8 г% (в среднем 13,7); в единицах (процентах) умужчин — от 80 до 108 ед., у женщин — от 70 до 95 ед.

Определение количестваэритроцитов и лейкоцитов

Оборудование и реактивы:

1. смесители (меланжеры) или пробирки дляподсчета эритроцитов и лейкоцитов.

2. 3% — раствор NaCl (для разведенияэритроцитов) или жидкость Гайема.

3. 3% раствор уксусной кислоты.

4.

Счетнаякамера.

Смесителипредставляют собой капиллярную пипетку с расширением- ампулой, содержащейбусинку, способствующую смешению крови с разводящей жидкостью. Смесители, предназначенные для подсчетаэритроцитов, обладают капилляром более тонкого калибра и более объемистойампулой на них нанесены метки одна — 0,5 другая — перед входом в ампулу — 1.0,третья — у выхода из ампулы — 101.

Принабирании крови до метки 0,5 она окажется разведенной в 200 раз, при набираниидо 1,0 — в 100 раз. Для разведения эритроцитов применяют 3% раствор повареннойсоли или жидкость Гайема, в которой лучше сохраняется форма эритроцитов.Смеситель для лейкоцитов имеет более широкий просвет капилляра и меньшую повеличине ампулу. Нанесены три метки: 0,5, 1,0 и 11. Это позволяет развестикровь в 10, либо в 20 раз (чаще разводят в 20 Раз). Для разведения лейкоцитовиспользуют 3 — 50% раствор уксусной кислоты. Уксусная кислота растворяетэритроциты, что позволяет вести подсчет только лейкоцитов.

Счетная камера.

Дляподсчета форменных элементов наиболее часто применяется камера типа Бюркера свыгравированной на ней сеткой Горяева. Счетная камера состоит из толстогопредметного стекла с особым углублением. На дне углубления счетной камерывыгравирована сетка, в клетках которой и подсчитываются форменные элементы. Покраям углубления имеются возвышения, куда накладывается покровное стекло. Междунижней поверхностью этого стекла и дном углубления образуется замкнутоепространство, которое и представляет собой счетную камеру. Глубина камеры соответствует 0,1 мм. Счетнаякамера типа Бюркера разделена пополам глубокой канавкой и имеет на каждойполовине сетку Горяева, что позволяет сразу считать 2 капли, не заполняя вновькамеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15Х15), 25 из которых разделенына малые, по 16 в каждом; имеются также пустые квадраты, собранные в группы по4 квадрата. Всего в сетке 100 больших пустых квадратов, собранных в 25 групп(5X5). Каждая сторона маленького квадратика равна 1/20 мм, а так как высотакамеры составляет 0,10 мм, то объем равен 1/4000 ммЗ.

Ход исследования:

Для подсчета эритроцитов

берут смеситель для эритроцитов, надевают резиновую трубочку, легкимнасасыванием набирают кровь из укола до метки 0,5. Избыток крови удаляютфильтровальной бумагой, после чего кончик смесителя погружают в приготовленныйзаранее флакон с 3% раствором поваренной соли или раствором Гайема и насасываютраствор, заполняя всю ампулу до метки 101. Тотчас снимают резиновую трубку,зажимают смеситель по длине между большим и указательным или средним пальцем ивстряхивают в течение 3 минут. После этого заполняют счетную камеру, сливают

1-2 капли ивыпускают последующую каплю на сетку.

Для подсчета лейкоцитов

кровь из места укола набирают до метки0,5, затем разводят 3% раствором уксусной кислоты до метки 11. Энергично встряхивают в течение 3 минут,после чего сливают

1-2капли и заполняют счетную камеру. При работе с пробирками

дляподсчета эритроцитов, наливают 4 мл 3% раствора поваренной соли или жидкостиГайема и в нее выпускают 0,02 мл. крови,

отмереннойпипеткой от гемометра Сали. Для подсчета белых кровяных элементов в пробиркуналивают 0,4 мл 3 — 5% раствора

уксуснойкислоты и 0,02 мл крови. Энергично встряхивают пробирки, затем в жидкостьопускают пипетку из гемометра Сали и,

набравсодержимое, заполняют счетную камеру.

Заполнение счетных камер:

Хорошовымытое и вытертое шлифованное покровное стекло накладывают на выступающиебоковые края. Мякотью больших пальцев покровное стекло притирают, двигая вверхи вниз, все время плотно прижимая, пока не появятся, так называемые, Ньютоновыкольца. Перед заполнением камеры вновь энергично встряхивают смесители.выпускают 2 капли на фильтровальную бумагу, а третьей заполняют щелку междукамерой и покровным стеклом. Жидкость покапиллярности засасывается между ними и заполняет пространство над сеткой.Жидкость при заполнении камеры не должна затекать в желобки, если это стучится,то ее удаляют фильтровальной бумагой.

Подсчет эритроцитов.

Подсчет производят спустя 1-2 минуты(когда эритроциты осядут на дно камеры), пользуясь объективом 40Х и окуляром 7X, либо объективом 8Х иокуляром 15Х.

Чтобы не сбиться со счета, придерживаютсяопределенной

последовательностисчета: передвигая из квадрата в квадрат по

горизонталиодин ряд слева направо, следующий — справа налево. Считают, помимо находящихсявнутри квадрата, все эритроциты, лежащие на двух линиях, например, на левой иверхней, и пропускают все лежащие справа и снизу. Считать эритроциты надо в 5больших квадратах, т. е. в 80 маленьких.

Чтобы избежать неточности, вследствие невполне равномерного распределения крови в камере, выбирают для подсчета не 5рядом лежащих квадратов, а продвигаются по всей сетке.

Количество эритроцитов в 1 ммЗ (искомое)вычисляют следующим образом: единицей счета всегда, при всяком подсчете, влюбой сетке служит малый квадрат. Объем его, как было указано, равен 1/4000мм3. Сосчитав эритроциты в 5 больших квадратах (80 малых квадратов), делят этоколичество на 80 и умножают на 200 (степень разведения крови) и на 4000 (чтобыполучить количество

клетокво всем кубическом миллиметре); практически, следовательно, полученное числоумножают на 10000 (прибавляют четыре нуля).

Пример

:В 80 маленьких квадратах подсчитано 480 эритроцитов. Следовательно, количествоэритроцитов в 1 ммЗ крови равно:

480*4000*200

— =4 800 000

80

Подсчет лейкоцитов.

Для получения достаточно точногорезультата при подсчете лейкоцитов необходимо сосчитать не менее 100 большихквадратов (=1600 малых). Количестволейкоцитов в 1 мм3 получается следующим образом: число, сосчитанное в3100больших квадратах, делят на 1600 (приводят к 1 малому квадрату) и умножают на20 (степень разведения) и на 4000; практически, сокращая постоянные цифрыформулы, количество сосчитанных лейкоцитов (при разведении в 20 раз) умножаютна 50.

Пример:

в 100 больших квадратах сосчитано 120 лейкоцитов.

Следовательно,количество лейкоцитов в 1 ммЗ равно

120*4000*20

-----------=6000

1600

Оценка полученных данных:

Нормальноеколичество эритроцитов в 1 ммЗ от 4500000 до 5000000. В норме среднееколичество лейкоцитов в 1 мм3 от 5000 до 9000 (крайние границы 4000 — 9000).

Вычисление цветового показателя:

Зная число эритроцитов в крови и содержание вней гемоглобина, можно высчитать в какой мере насыщен каждый эритроцит.Цветовой показатель соответствует максимальному содержанию гемоглобина в одномнормальном эритроците, величина его условно принимается за единицу.

Для вычисления цветового показателя пользуютсяследующей формулой:

найденное количество Нв найденное число эритроцит.

— : —

нормальное количество Нв нормальное число эритроцит.

Практически определение цветового показателяпроизводят путем деления процента (единиц) гемоглобина на удвоенные две первыецифры числа эритроцитов. Если же число эритроцитов меньше 1000000, то процентНв делится на удвоенную первую цифру числа эритроцитов.

Приготовление мазков:

Мазок крови делают обычно вслед за наполнениемобоих смесителей. Вытирают палец и пользуются свежевыступившей каплей крови.Кровь берут на предметное стекло, которое должно быть тщательно обезжирено.Затем шлифованным предметным стеклом,

илитолстым покровным стеклом, которое ставят на первое предметное стекло под углом45' в непосредственной близости от капли крови, чтобы она растекалась тонкимслоем по ширине шлифованного стекла, делают на нем мазок. Хорошо сделанныймазок желтоватого цвета, просвечивает. Вслед за этим мазок фиксируют.

Фиксациямазка делается для того, чтобы уплотнить протоплазму форменных элементов кровии сделать мазок более устойчивым. Высохший на воздухе мазок погружается дляфиксации в банку с метиловым спиртом на 1 — 3 мин., либо в смесь Никифорова,состоящую из равных частей этилового спирта и эфира, на 10-20 минут. Поокончании фиксации мазки вынимают пинцетом и ставят в вертикальном положении нафильтровальную бумагу для высушивания.

0крашиваниемазка производится, как правило, при помощи смеси нескольких красок. Наиболеешироко применяется окраска мазка по Романовскому — Гимзе. Перед употреблениемкраску разводят дистиллированной водой из расчета 1 — 2 капли на 1 мл воды.Мазки укладывают на мостики из стеклянных палочек, опирающихся на края кюветы,и заливают красителем в максимальном количестве, которое может удержаться настекле. Продолжительность окраски 30 минут. После окраски краситель смываютструей воды, а мазки ставят вертикально на фильтровальную бумагу для просушки.

Окраска ретикулоцитов:

1. Предметные стекла (обезжиренные).

2. 1% раствор бриллианткрезилблау (спиртовой).

3. Шлифовальное предметное стекло.

4. Чашка Петри.

5. Фильтровальная бумага.

6. Стеклянная палочка.

7. Иммерсионное масло.

Методика окрашивания:

На обезжиренное абсолютно чистое предметноестекло наносят стеклянной палочкой каплю 1% алкогольного раствора краскибриллианткрезилблау. Шлифовальным предметным стеклом

эту каплюразмазывают так же, как при приготовлении обычного

мазка крови.После подсыхания красителя на него наносят каплю

крови иделают тонкий мазок, который сразу помещают во влажную камеру (чашка Петри свложенным в нее кусочком мокрой фильтровальной бумаги). Через 3-5 минут мазоквынимают, высушивают на воздухе и исследуют под микроскопом с иммерсией.

Подмикроскопом эритроциты при этой окраске желтовато-зеленоватого цвета; вотдельных же эритроцитах замечается синяя

сеточка,иногда скудная и нежная, иногда обильная, зернистая -

это и естьретикулоциты.

Подсчет ретикулоцитов производится так:

Подсчитывают в поле зрения 1000 эритроцитов иотмечают сколько среди них ретикулоцитов. Найденное количество делят на 10.Нормальное содержание ретикулоцитов в крови 0,2 — 1,0%.

Подсчет лейкоцитарной формулы:

Лейкоцитарной формулой называют процентноесоотношение

отдельныхформ лейкоцитов крови. Для более точного ее вычисления необходимо просмотретьне менее 200 лейкоцитов. Так как различные виды лейкоцитов распределяются помазку неравномерно,

необходимособлюдать следующие правила: проводить подсчет по

верхнемуи нижнему краю мазка, передвигая мазок по зигзагообразной линии. Считают триполя по самому краю в горизонтальном направлении, затем — три поля, направляяськ середине мазка, и т. и. Следовательно, в каждом из четырех участковнасчитывают 50 клеток, а всего — 200. Для подсчета лейкоцитарной формулыиспользуют специальный клавишный счетчик, на каждом клавише которого отмечаетсяначальная 6yква названия лейкоцитов. Результаты подсчета лейкоцитарной формулызаписываются в виде лейкограммы, имеющей в норме примерно следующий вид:

нейтрофилы

Колич. Лейкоцитов

базо-филы

эозино-филы

юные

палочко-ядерные

сегменто-ядерные

лимфо-циты

моно-циты

8000

1%

4%

0

4%

60%

25%

6%

Микроскопическая картина крови:

Эритроцит

— безъядерная клетка, окрашивающаяся кислыми красками врозовый цвет и имеющая форму несколько уплощенного круга с вдавлением в центре.Диаметр в среднем около 8 микрон.

Лейкоциты

различаются среди эритроцитов по их большей величине, поналичию ядра и по характеру окраски. Различают лейкоциты: базофильные,эозинофильные, нейтрофильные, лимфоциты и моноциты.

Первые три вида объединяются в группугранулоцитов, т.е. клеток в протоплазме которых имеется зернистость.

Базофилы

— клетки размером 12 — l4 микрон, с ядром неопределеннойформы. Протоплазма содержит многочисленные крупные зерна, окрашивающиеся вфиолетовый цвет. Количество клеток не превышает 0,5-1%.

Эозинофилы — клетки размером 12 — 15",имеют сегментированное ядро в виде двух грушевидных сегментов, соединенныхмежду собой тонким мостиком. Наиболее характерным признаком эозинофила являетсязернистость протоплазмы ярко-красного цвета. Количество эозинофилов в норме от1 до 4%.

Нейтрофилы

— круглые клетки, средняя величина 9 — 12 микрон.

Протоплазмаслегка розоватая с мелкой зернистостью красновато-

фиолетовогоцвета. Ядро состоит из 2-х, 4-х и более сегментов, соединенных между собойтоненькими мостиками, окрашивается основными красками в сине-фиолетовый цвет.Сегментоядерные нейтрофилы составляют от 50 до 68%. В менее зрелых клетках ядро

вытянутов виде палочки, так называемые палочко-ядерные нейтрофилы 1-4%. Еще реже, около1%, встречаются нейтрофилы с

круглымядром — юные формы. Увеличение числа палочко-ядерных, появление юных, вплоть домиелоцитов, носит название сдвига влево, или регенеративного сдвига. Сдвигом в право называется изменение формулылейкоцитов в сторону увеличения более зрелых клеток.

Лимфоциты

— клетки размером 7 — 9 микрон. Лимфоциты бывают малые,средние и широкопротоплазменные. Ядро круглое или овальное, сине-фиолетовогоцвета; иногда оно имеет с одной стороны острое углубление. Протоплазма голубая,нередко различаются ярко-красные зерна. Вокруг ядра остается бесцветный илиболее бледный ободок. В норме лимфоциты составляют 25 — 38%.

Моноциты

— самая большая клетка нормальной периферической крови.Диаметр 12-20 микрон с крупным овальным ядром, почковидной или подковообразнойформы. Окраска ядра светлее, чем у нейтрофилов и лимфоцитов, протоплазмасеро-голубого цвета с мелкой азурофильной зернистостью. Моноциты составляют6-8% всех лейкоцитов крови.

Определение длительности кровотечения по Дуке

0борудование и реактивы:

1. ИглаФранка или скарификатор.

2.Фильтровальная бумага.

3.Секундомер.

Ход исследования:

Иглой Франка делают укол глубиной 3 мм вмякоть пальца или мочку уха. Самопроизвольно выступающая кровь снимается каждые15-30 секунд фильтровальной бумагой. Через 1-3 минуты снятая фильтровальнойбумагой капля становится маленькой, затем бумага совсем не окрашивается.Промежуток времени от момента появления первой капли крови до прекращенияокрашивания фильтровальной бумаги обозначается как продолжительностькровотечения.

Оценка полученных данных:

Нормальная продолжительность кровотечения 2 — 4 минуты.

Определение времени свертываемости крови поспособу Бюркера

Оборудование и реактивы:

1.Часовое стекло.

2.Чашка Петри с влажной фильтровальной бумагой на дне.

3.Тонкая стеклянная палочка или игла.

4.Игла Франка или скарификатор.

5.Дистиллированная вода.

6.Секундомер

Ход исследования:

На часовое стекло наносят одну каплюпрокипяченной дистиллированной воды. Иглой Франка делают укол в мякоть пальца,первую каплю снимают, а вторую наносят на часовое стекло, помешивают тонкойстеклянной палочкой. Время взятия крови отмечают по секундомеру. Часовое стеклопомещают в чашку Петри. Лучше всего производить исследование при температуре25'C. Каждые полминуты тонкой стеклянной палочкой или иглой прикасаются к каплекрови от центра к периферии до тех пор, пока за палочкой не потянутся первыениточки фибрина, после чего отмечают время появления их.

Оценка полученных данных:

У здоровых людей время свертываемости пометоду Бюркера равно 5-6 минутам.

еще рефераты

Еще работы по медицине

Реферат по медицине

Хронический обстуктивный бронхит

29 Августа 2013

Реферат по медицине

Пневмонии. Антибактериальная терапия. Новые подходы к лечению

Допплерометрия маточно-плацентарно-плодового кровотока

29 Августа 2013