Реферат: Бактериальная система секреции белков первого типа
/>/>/>
БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
Биологический факультет
Кафедра молекулярной биологии
БАКТЕРИАЛЬНАЯ СИСТЕМА СЕКРЕЦИИ БЕЛКОВ
ПЕРВОГО ТИПА
Курсовая работа
студента 3 курса
Войцицкого А. М.
Научный руководитель:
к.х.н., преподаватель Русь О. Б.
Минск 2004
Содержание
Введение… 5
Краткая характеристика бактериальных систем секреции… 6
Строение системы секреции первого типа… 8
ABC-транспортеры… 14
Организация генов, кодирующихкомпоненты системы секреции первого типа 16
Сигнальные последовательности субстратов… 18
Заключение… 20
Список литературы… 21
Списоксокращений
АТФ-связывающая кассета (ATP-binding cassette) - ABC
Белок, связывающий мембраны (Membranefusion protein) - MFP
Белок внешней мембраны (Outermembrane protein) - OMP
Ядерный магнитный резонанс - ЯМР
Введение
Процесс секреции белковявляется важным аспектом жизнедеятельности бактерий, поскольку значительноеколичество белков бактериальной клетки локализованы вне цитоплазмы. Способностьк секреции белков является важнейшей для вирулентных бактерий, поскольку в процессеинфекции многие белковые продукты должны располагаться на внешней поверхностибактериальной клетки, либо секретироваться во внешнюю среду. Кроме того,секреция белков имеет важнейшее значение для биотехнологии, поскольку очисткабелков из культуральной среды простого состава значительно проще, чем из лизатов,которые представляют собой сложные смеси различных веществ. В связи с этимизучение процесса белковой секреции является весьма актуальной проблемой.Результатом проведенных ранее исследований стало обнаружение нескольких путейэкспорта белка. Впоследствии они были разделены на группы, внутри которыхпроцесс секреции идентичен или очень схож. Сейчас выделяют пять основных типовсекреции белков. Одним из них является система секреции первого типа. Посредствомэтой системы бактериальные клетки экспортируют широкий круг различныхсубстратов, включающий в себя ферменты, токсины, полисахариды, антибиотики идр. соединения. Несмотря на относительную простоту устройства этого аппаратасекреции, остается еще достаточное количество невыясненных вопросов в этойобласти. Недостаточная изученность строения и функционирования этой системысекреции, а также неоспоримая важность секретируемых ею белков являютсяпричиной, по которой изучение этой темы является весьма актуальным.
Целью данной работы являетсясбор и обобщение имеющейся на этот день информации о бактериальной системесекреции первого типа.
/>/>/>/>Краткаяхарактеристика бактериальных систем секреции
Для секреции белковбактериальные клетки используют различные системы секреции в зависимости отстроения и конечной локализации белка. Поэтому является необходимым приведениенебольшого обзора систем секреции всех типов.
Секреция первого типа.Аппарат этой системысекреции устроен относительно просто. Он включает в себя три компонентабелковой природы. Эта система является Sec-независимой и осуществляет секрецию субстратовнепосредственно из цитоплазмы в одну стадию без периплазматических посредников.По этому пути секретируются токсины, протеазы, липазы, антибиотики и другиесоединения (D. Thanassi et al., 2000).
Секреция второго типа. Эта система секреции устроена ужедовольно сложно. Характерной особенностью является ее разделение на две части исекреция субстратов в две стадии. Первая часть, называемая Sec-системой, экспортирует белки черезцитоплазматическую мембрану, далее белки либо остаются в периплазме, либосекретируются через внешнюю мембрану посредством терминальных компонентовсистемы секреции (S. Lory, 1998). По этому пути секретируютсятакие белки, как пектатлиазы, пектинметилэстеразы и целлюлазы рода Erwinia, целлюлаза, протеаза и амилаза Xanthomonascampestris, липаза, фосфолипаза, эластаза,энтеротоксин А у Pseudomonasaeruginosa, амилаза и протеаза Aeromonashydrophila, хитиназа, протеаза и холерныйтоксин Vibriocholerae (J. Hacker at al., 2000). В связи с большим количеством и разнообразиемсубстратов, секретируемых через этот аппарат секреции, его называют “общимсекреторным путем” (GeneralSecretory Pathway, GSP).
Секреция третьего типа. Этот тип секреции, подобно первомутипу, является независимым от Sec-системы.Характерной особенностью его является доставка субстратов (фактороввирулентности) непосредственно в клетку эукариотического хозяина, также наличиебольшого количества секреторных шаперонов. Сам аппарат включает в себя околодвадцати белковых компонентов, большая часть которых расположена во внутреннеймембране, и по структуре довольно схож с системой сборки жгутика. Посредствомсистемы секреции третьего типа экспортируются многие факторы вирулентностипатогенов человека и животных, а также Avr-белки, харпины и другие факторы вирулентности фитопатогенныхбактерий (J. Hacker еt al., 2000).
Секреция четвертоготипа. Аппаратсекреции четвертого типа состоит из двух компонентов: конъюгационного канала,через который происходит транслокация субстратов, и конъюгационного пилюса,необходимого для контакта с реципиентной клеткой. Строение этой системысекреции сходно со строением аппарата конъюгации некоторых плазмид. Она такжеобладает широкой специфичностью как субстратов (экспортируются крупные нуклеопротеидныекомплексы, сложные белковые токсины, мономерные белки), так и реципиентов, т.к.ими могут служить практически все живые организмы (S. Lory, 1998).
Секреция пятого типа. В некоторых публикациях именуетсясистемой секреции четвертого типа. Эта система секреции включает в себя группубелков, называемых автотранспортерами, к числу которых относятся: протеазы (IgA) Neiseriagonorrhoeae, цитотоксин (Vac) Helicobacterpylori. Автотранспортеры экспортируются изцитоплазмы через Sec-систему сотщеплением сигнальной аминоконцевой последовательности. Некоторые из них могутоставаться заякоренными в клеточной стенке, другие же экспортируютсянепосредственно во внеклеточное пространство (J. Hacker еt al., 2000).
/>/>/>/>Строение системы секреции первого типаВ сравнении с другимисистемами секреции аппарат секреции первого типа устроен относительно просто.Во всех случаях он состоит из трех компонентов белковой природы. Первыйпринадлежит к классу АТФаз, называемых ABC-транспортерами и обеспечивает энергозависимые стадиипроцесса транспорта. Этот белок является заякоренным во внутренней мембране иассоциированным со вторым белком MFP, обеспечивающимслияние цитоплазматической и наружной мембраны, и фактически образующим канал,через который транспортируется секретируемый белок. Третий белок OMP, так называемый белок-щвейцар (gatekeeper), локализован во внешней мембране.Его функцией является создание секреторного мембранного канала и его закрытие вотсутствие субстрата (D. Thanassi еt al., 2000).
/>
Рис. 1. Строение системысекреции I типа.
(по D. Thanassi еt al., 2000)
Первыйтип секреции используется широким кругом грамотрицательных бактерий дляэкспорта токсинов, протеаз, липаз. Кроме того, эта система сохраняется припереходе от прокариот к эукариотам и экспортирует большое число токсинов иантибиотиков. Система секреции первого типа является Sec-независимой и экспортирует белки в один этап непосредственноиз цитоплазмы во внешнюю среду через внешнюю мембрану без периплазматическихпосредников. Субстраты этой системы секреции лишены сигнальных амино-концевыхпоследовательностей, сигнал к секреции у них расположен на карбокси-конце в пределахпоследних 60 аминокислотных остатков (D. Thanassi еt al., 2000).
Системасекреции α-гемолизина Escherichiaсoli представляетсобой прототип системы секреции первого типа, и на сегодняшний день хорошоизучена. Она состоит из трех компонентов: TolC, HlyD, HlyB. Белок TolC является аналогом OMP для экспорта α-гемолизина, и представляет собой тримерный комплекс,расположенный во внешней мембране. Предполагается, что он состоит изпориноподобного β-складчатого мембранного домена с гидрофильной карбокси-концевойобластью, расположенной в периплазматическом пространстве. Однако, недавнийанализ последовательности указывает на то, что TolC и другие OMP неявляются поринами. OMP функционируеткак канал секреции через внешнюю мембрану, что было доказано порообразующимдействием олигомеров TolC вэкспериментальных липидных бислоях (D. Thanassi еt al., 2000). Периплазматический MFP (HlyD)также является тримерным и взаимодействует и с OMP, и с ABC-транспортером (HlyB). HlyD содержиткороткий гидрофильный амино-концевой домен, заякоренный во внутренней мембране,включающий около 150 аминокислотных остатков; крупный гидрофобный домен, расположенныйв периплазме, включающий 275 аминокислотных остатков, и карбокси-концевойдомен, имеющий β-складчатую структуру, способный связываться с внешнеймембраной, содержащий 275 аминокислотных остатков (M. J. Fath еt al., 1993). Предполагается, что MFP облегчает секрецию субстрата без промежуточного периплазматическогозвена, формируя закрытый канал, соединяющий внутреннюю и внешнюю мембраны, иосуществляя прямой контакт между ABC-транспортером и OMP. Что касается HlyB, то его точное строение пока не установлено,предполагается, что он состоит из восьми доменов. Два из них в амино-концевойобласти и шесть в центральной гидрофобной области. Результатыэкспериментального изучения этого аппарата привели к возникновению двух моделейсекреции первого типа (D. Thanassi еt al., 2000).
Экспериментыпосекреции α-гемолизина E. coli показывают, что ABC-транспортер и MFPассоциируются еще до связывания с субстратом. Прикрепление субстрата к этомукомплексу вызывает контакт MFP с OMP. Это соединение является обратимым, иразрушается сразу после экспорта субстрата. Энергия гидролиза АТФ посредствомABC-транспортера расходуется только на транслокацию субстрата и не требуетсядля связывания субстрата или для сборки комплекса (D. Thanassiеt al., 2000).
Экспериментыпо секрециигемопротеина Serratia мarcescens и металлопротеазы Erwiniachrysanthemi указывают на немного иной порядоксобытий. По этой модели,ABC-транспортер и MFP не связываютсяперед закреплением субстрата. Субстрат в первую очередь связывается с ABC-транспортером, затем образовавшийсякомплекс ассоциируется с MFP, итолько потом происходит связывание с OMP, после чего происходит секреция субстрата. Для определения правильноймодели, или для уточнения возможных индивидуальных отличий в функционированииаппарата секреции первого типа необходимы дальнейшие исследования (D. Thanassi еt al., 2000).
Былоустановлено, что ОМР системы секреции α-гемолизина (TolC), используется также в системесекреции колицина V и в некоторыхдругих системах, например при сегрегации хромосом, а также он может формироватьканал во внешней мембране, специфический для медикаментов. ОМР системы секрециигемопротеина S. marcescens, называемый HasF, является в высокой мере идентичным с TolC E. сoli. Для воссоздания секреции HasА уE. сoli необходимо наличие в качестве ОМРлибо TolC, либо HasF, либо PrtF.Такие гибридные секреторные системы функционируют как для секреции HasA, так и для секреции протеазы. Этоявляется типичным примером комплементации ОМР (R. Binet et al., 1997). В частности, степень гомологии между компонентамисистемы секреции липазы S. marcescens, белками lipB, lipC, lipD и компонентами транспортераметаллопротеазы Er. chrysanthemi PrtD, PrtE, PrtF составляет 45-55%. А гомология междуLipB и LipC, и HasD,и HasE уS. marcescens составляет45-53%. Эти показатели считаются довольно высокими (H. Akatsuka et al., 1998). Однако было выявлено, чтоне все комбинации между компонентами гибридных секреторных систем являютсяактивными. Так, HasE формируетактивные экспортеры и с PrtF,и с TolC, тогда как PrtE может формировать активный экспортер только с PrtF, но не с TolC. Исследования этих мультибелковых комплексов in vitro подтвердили существование некоторых функциональныхразличий между HasE и PrtE. Полученные результаты могут бытьполезными при определении сайтов, ответственных за связывание MFP и OMP (H. Akatsuka et aj., 1998).
Сдругой стороны, исследования in vivo и in vitro показывают, что HasD и PrtDмогут образовывать активные секреторные системы с PrtE и HasE влюбых комбинациях (H. Akatsuka et al., 1998).
Такжебыли проведены исследования по изучению секреции липазы LipA S. marcescens посредством системLipB-LipC-LipDи HasD-HasE-HasF. В результате опытов было выяснено, чтоHasD-HasE-HasF-транспортер осуществляет секрецию LipA так же эффективно, как и LipB-LipC-LipD. LipB-HasE-HasF-системамогла производить секрецию LipA,но не была способна секретировать HasA, система HasD-Lip-CLipD не была способна к секреции обоих субстратов (H. Akatsuka et al., 1998).
Вслучае экспериментов с системами секреции липазы LipA S. marcescens и металлопротеазы PrtC E.chrysanthemi былиполучены сходные результаты, приведенные в таблице:
Таблица 1
Эффективностьгибридных систем секреции (по H. Akatsuka et al., 1998).
/>
Невсе комбинации компонентов привели к формированию эффективных систем секреции.Полученные результаты позволили сделать некоторые конкретные выводы. Вчастности, что PrtD-PrtE-LipD-системане способна экспортировать ни LipA,ни PrtC, в то время как, LipB-LipC-PrtF-системаоказалась настолько же функциональной для LipA секреции вE. coli как и вS. marcescens. PrtE может взаимодействовать только с PrtF, тогда как HasE и LipCпоказывают более широкие возможности связывания с различными белками. Было такжеустановлено, что PrtD не можетассоциироваться с LipC, а LipB-PrtE-PrtF-системаявляется очень неэффективной в отношении экспорта LipA и PrtС (H. Akatsuka et al., 1998).
В ходеисследований было установлено влияние шаперона SecB на процесс секреции HasA у S. marcescens. Точное его значение на данный момент не установлено, нобыло показано, что инактивация этого шаперона приводит к блокированию секреции HasA (P. Delepelaire et al., 1998).
Кнастоящему времени установлено строение систем секреции первого типа у многихмикроорганизмов, некоторые из них приведены в таблице 2. Однако остаетсядовольно большое количество секреторных систем неполного состава, для которыхостаются невыясненными либо некоторые компоненты, либо субстраты (M. J. Fath еt al., 1993).
Таблица2
Некоторые системы секреции первоготипа (по M. J. Fath еt al., 1993).
/>
/>/>/>/>ABC-транспортерыСемействоАВС–транспортеров включает в себя специфические АТФ-связывающиебелки-транслокаторы. В 1993 году M. J. Fath (M. Fath еt al., 1993) предложил классифицировать их на три группы:эукариотические АВС-транспортеры, бактериальные АВС-ипортеры и бактериальныеАВС-экспортеры, на рис.2 представлено строение некоторых из них. Характерно,что ABC-белки являются консервативными иосуществляют трансмембранный перенос большого количества субстратов как впрокариотических, так и в эукариотических клетках. Они наиболее часто состоятиз двух закрепленных в мембране гидрофобных и двух консервативных гидрофильныхАТФ-связывающих доменов. Эти домены могут быть как частями одного полипептида,так и нескольких отдельных полипептидов. В опытах in vitro было показано, что в ряде случаев этих четырех доменоводного или нескольких полипептидов оказывается достаточно для осуществлениятрансмембранного перемещения растворов. И все же большинство бактериальных ABC-транспортных систем включает в себяразличные дополнительные белки. Этими дополнительными белками являются MFP и OMP (R. Binet et al., 1997).
АВС-импортерыимеют строение, сходное со всеми остальными представителями транспортныхАТФ-аз. Но при образовании транспортной системы они присоединяют иныекомпоненты. В системах, осуществляющих импорт, отсутствуют характерные длясистемы первого типа OMP и MFP. Вместо них присутствует особыйпериплазматический белок, который связывается с импортируемым субстратом ипредоставляет его АТФ-азе для непосредственного переноса (M. Fath еt al., 1993).
ПомимоАВС-экспортеров, осуществляющих транспорт белков, в бактериальных клеткахсуществует обширная группа АВС-экспортеров, выполняющих транспорт небелковыхсубстратов, например, полисахаридов и ионов. Характерной особенностью этихпереносчиков является то, что они сами образуют активную транспортную систему ине требуют никаких дополнительных белков. Транспорт в этом случаеосуществляется не во внеклеточное пространство, а в периплазму (M. Saier, 2000).
ПодобныеАВС-транспортеры обнаружены как в клетках грамположительных и грамотрицательныхбактерий, так и в эукариотических клетках (M. Fath еt al., 1993).
/>
Рис. 2. СтроениеАВС-транспортеров (по M. Fath еt al., 1993).
/>/>/>/>Организациягенов, кодирующих компоненты/>/>системы секреции первого типаКакправило, гены, кодирующие все три компонента системы, организованы в одиноперон, обычно вместе с генами, кодирующими секретируемый белок. К примеру,гены, кодирующие четыре сходных по строению металлопротеазы E. chrysanthemi:PrtA (50кДа), PrtB (53 кДа), PrtC (55 кДа), PrtG (58 кДа) организованы в один оперон сгенами, кодирующими все три компонента системы их секреции: PrtD (ABC-транспортер), PrtE (MFP), PrtF (OMP). В случае с E. coli, ген hlyA, кодирующий α-гемолизин, объединен с генами hlyB и hlyD, кодирующими соответственно ABC-транспортер и MFP. Так же дело обстоит и у S. marcescens. Ген hasA, кодирующий внеклеточныйгемопротеин, организован в один оперон с генами hsaD (ABC-транспортер)и hasE (MFP). В этих двух случаях ген, кодирующий OMP, в единый оперон не включается исодержится отдельно. Кроме того, у S. marcescens обнаружен оперон,содержащий только гены, которые детерминируют компоненты системы секреции и ниодного гена, ответственного за синтез экспортных белков. Он содержит три гена: lipB (ABC-транспортер), lipC (MFP), lipD (OMP) (H. Akatsuka et al., 1998). Был выявлен также ряд оперонов, которые содержатгены, не относящиеся ни к системе секреции, ни являющиеся генами секретируемыхбелков. Эти гены кодируют белки, которые тем или иным образом выполняютрегуляторную функцию (M. Fath еt al., 1993).
ОрганизацияHly-оперона и некоторых других опероновпредставлена на рис. 3. Ген hlyAкодирует 1023 аминокислоты α-гемолизина (HlyA), hlyBкодирует 707 аминокислот ABC-транспортера (HlyB), hlyDкодирует 477 аминокислот MFP (HlyD), и hlyC кодирует 170 аминокислот белка, который не имеетсекреторной функции, но облегчает активацию HlyA. Ген tolC,кодирующий 495 аминокислот OMP (TolC) в этот оперон не включается исодержится отдельно.
Наданный момент выявлены и расшифрованы опероны систем секреции первого типа многихмикроорганизмов (M. Fath еt al., 1993).
/>
Рис.3. Оперонная организация генов, кодирующих компоненты системы секреции I типа некоторых бактерий. Сверхувниз: система секреции α-гемолизина E. coli, протеаз E. chrysanthemi,колицина VE. coli, субтилина B. subtilis, капсулярного полисахарида E. coli (по M. Fath еt al., 1993).
/>/>/>/>Сигнальныепоследовательности субстратовСубстраты,секретируемые посредством системы секреции первого типа, не имеют сигнальныхамино-концевых последовательностей. Вместо них имеются карбокси-концевыесекреторные сигналы, расположенные в пределах последних 60 аминокислотныхостатков, впервые обнаруженные на α-гемолизине. В экспериментах спротеазой PrtG E. chrysanthemi было установлено, что наименьшаякарбокси-концевая последовательность, позволяющая начать эффективную секрецию,содержит последние 29 аминокислот PrtG, кроме того, низкая, но все же существенная секреция может быть индуцированапоследними 15 аминокислотами PrtG (R. Binet et al., 1997). Кроме того, было показано, что карбокси-концевая сигнальнаяпоследовательность, состоящая из отрицательно заряженных аминокислотныхостатков, является консервативной для гомологичных протеаз. Сравнениепоследовательностей показало, что протеазы и липазы тоже имеют весьма сходныекарбокси-концевые последовательности. Однако важным является тот факт, чтогомология последовательностей этих соединений является неполной. А вот секреторныесигналы протеаз и различного рода токсинов являются весьма различными испецифическими, кроме того, комплементация между компонентами систем секрецииэтих двух семейств белков является очень незначительной. Тем не менее, каждыйсигнал может индуцировать секрецию чужеродного белка посредством своегоспецифического транспортера (R. Binet et al., 1997).
Изучениефрагмента карбокси-конца очищенной протеазы G посредством ЯМР показало, что он представляет собой стабильнуюα-спираль, расположенную перед 7 – 8 концевыми аминокислотными остатками.
Приизучении процессов секреции белков была показана роль особой области, расположеннойвыше карбокси-концевой сигнальной последовательности на большинствеэкспортируемых субстратов. Токсины, протеазы и липазы, секретируемые системойсекреции первого типа, имеют такую область, состоящую из богатой глицином последовательности(GGXGXD), которая повторяется 4–36 раз, взависимости от белка.
Присравнении процессов секреции различных белковых субстратов, содержащих такиепоследовательности, было установлено, что они играют важнейшую роль присекреции некоторых пептидов. Возможно, что богатые глицином повторы действуюткак внутренние шапероны, способствуя лучшему разделению секреторного сигнала иостатка белка (R. Binet et al., 1997).
/>/>/>/>Заключение
Посредством системысекреции первого типа секретируется широкий круг субстратов, включающий в себяряд ферментов, токсинов, антибиотиков, и других биологически активныхсоединений. Эта система секреции характерна как для прокариотических, так идля эукариотических клеток. Во всех случаях она состоит из трех компонентов белковойприроды: ABC-транспортера, который являетсяАТФ-азой, осуществляющей энергозависимые стадии транслокации; белка,формирующего периплазматический канал, соединяющий ABC-транспортер с третьим компонентом системы –белком-швейцаром, образующим секреторный канал во внешней мембране. Система секрециипервого типа является Sec-независимойи осуществляет секрецию субстрата в одну стадию из цитоплазмы непосредственново внеклеточное пространство без присутствия каких-либо периплазматическихпосредников. Сигналом к секреции по этому типу является последовательность из60 аминокислотных остатков, находящаяся на карбокси-конце полипептида. Выявленытакже гибридные системы секреции первого типа, состоящие из компонентов присущихразным системам этого типа. Несмотря на относительно простое устройство даннойсистемы секреции в сравнении с другими аппаратами секреции, существует довольнобольшое количество неясных и спорных вопросов в этой области. В частности, недостаточно изучена последовательность событий в процессе секреции субстратов,а также видовая специфичность строения самой системы. В связи с этим инемаловажным значением секретируемых соединений, изучение этого вопросаявляется весьма актуальным и перспективным.
/>/>/>/>СписоклитературыH. Akatsuka, R. Binet, E. Kawai, C. Wandersman, and K. Omori. Lipase secretion by bacterial hybrid ATP-Binding Cassette Exporters: molecular recognition of the LipBCD, PrtDEF, and HasDEF exporters. // Journal of bacteriology. — 1997. – Vol. 179. №15 — Р. 4754–4760. R. Binet, S. Le´toffe, J. M. Ghigo, P. Delepelaire, C. Wandersman. Protein secretion by Gram-negative bacterial ABC exporters – a review. // Gene. — 1997. – Vol. 192. — Р. 7–11. W. H. Bingle, J. F. Nomellini, and J. Smit. Secretion of the Caulobacter crescentus S-Layer potein: further localization of the C-terminal secretion signal and its use for secretion of recombinant proteins. // Journal of bacteriology. — 2000. – Vol. 182. №11. — Р. 3298–3301. P. Delepelaire, C. Wandersman. The SecB chaperone is involved in the secretion of the Serratia marcescens HasA protein through an ABC transporter. // EMBO J. — 1998. — Vol. 17. №4. — P. 936–944. M. J. Fath, R. Kolter. ABC Transporters: Bacterial Exporters. // Microbiological reviews. -1993. – Vol. 57. №4. - Р. 995–1017. J. Hacker, J. B. Kaper. Pathogenicty islands and the evolution of microbes. // Annu. Rev. Microbiol. — 2000. – Vol. 54. — Р. 641–79. C. J. Hueck. Type III Protein Secretion Systems in Bacterial Pathogens of Animals and Plants. // Microbiology and molecular biology reviews. — 1998. – Vol. 62. №2. - Р. 379–433. S. Letoffe and C. Wandersman. Secretion of CyaA-PrtB and HlyA-PrtB Fusion Proteins in Escherichia coli: Involvement of the Glycine-rich repeat domain of Erwinia chrysanthemi protease B. // Journal of bacteriology. — 1992. – Vol. 174. №15 — Р. 4920–4927. S. Lory. Secretion of proteins and assembly of bacterial surface organelles: shared pathways of extracellular protein targeting. // Current Opinion in Microbiology. — 1998. – Vol. 1. — Р. 27–35.10. L. M. Moreira, J. D.Becker, A. P. and A. Becker. The Sinorhizobium meliloti ExpE1 proteinsecreted by a type I secretion system involving ExpD1 and ExpD2 is required forbiosynthesis or secretion of the exopolysaccharide galactoglucan. // Microbiology.- 2000. – Vol. 146. — Р. 2237–2248.
M. H. Saier. Families of transmembrane sugar transport proteins. // Molecular Microbiology. — 2000. — Vol. 35. №4. — P. 699–710. D. G. Thanassi, S. J Hultgren. Multiple pathways allow protein secretion across the bacterial outer membrane. // Current Opinion in Cell Biology. — 2000. — Vol. 12. — Р. 420–430.