Реферат: Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики трихомоноза

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ  УКРАИНЫ

ОДЕССКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙУНИВЕРСИТЕТ им. И.И.МЕЧНИКОВА

БИОЛОГИЧЕСКИЙФАКУЛЬТЕТКафедрамикробиологии, вирусологии.    СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭФФЕКТИВНОСТИМЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТРИХОМОНОЗА

                                               Квалификационнаяработа бакалавра 

                         студента пятого курса

                      заочногоотделения

                                                    БОГУША Андрея Николаевича

                                                   Научный руководитель

                                                   кандидат биологических наук, доцент

                                       Панченко Николай Никитович

Допущенак защите                            Защищена на заседании ДЕК         “____”_________2004р.                   “____”__________2004р.

Протоколзаседания                         соценкой_________________

кафедры№____________                Протокол№____________

Заведующийкафедры                      СекретарьДЕК_____________             ______________________

ОДЕССА-2004

<span Times New Roman",«serif»;mso-fareast-font-family:«Times New Roman»; mso-ansi-language:RU;mso-fareast-language:RU;mso-bidi-language:AR-SA">

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………………..3

1.ОБЗОРЛИТЕРАТУРЫ ………………………………………………...……………5

1.1.Систематикаи биологические  особенности  трихомононад…………….……..5

1.1.2.Метаболизм T.vaginalis………………………………………………………….7

1.1.3.Культуральные свойства трихомонад………………………………….………8

1.2.Устойчивость к физическим, химическим факторам и во внешней среде……8            

1.2.1.Условия инфицирования трихомонадами………………...……………..…….9

1.3.Механизмы патогенеза урогенитальной инфекции трихомонадной этиологии…..…………………………………………………………………………..10          

1.3.1.Клиника трихомоноза у мужчин………………………………………………12

1.3.2.Клиника трихомоноза у женщин………………………………………...……14

1.4. Методыдиагностики трихомоноза………………………..…………………….15

1.4.1.Микроскопия нативных и окрашенных препаратов……….………………..16

1.4.1.1.Метод смывов…………………………………………..…………………….16

1.4.1.2.Микроскопия нативных препаратов…………………………….….……….17

1.4.1.3. Микроскопияокрашенных препаратов…………………………….…....….18

1.4.2.Культуральное  исследование……………………………………….…………21

1.4.3.Иммунологическиеметоды……………………………………….…………….22

1.4.4.Методыгенной диагностики T.vaginalis…………………….…….…………..23

1.5.Лечение  трихомоноза……………………………………………….……………24

2.МАТЕРИАЛЫ  И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ...………………………………25

2.1.Исследование культуральным методом………………………………………...25

2.2Исследование методом микроскопии мазка…………………………………….26

2.3.Исследование  методомПЦР…………………………………………………….27

3.РЕЗУЛЬТАТЫИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ……………………...28

3.1.Анализданных выявления T.vaginalisу жителей Одесскогорегиона………...30

ВЫВОДЫ……………………………………………………………………………...33

СПИСОК  ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………………………………………34

Введение

Трихомоноз является  одним из наиболее распространённых заболеваний мочеполового  тракта  и   занимает  первое  место среди  болезней, передаваемых  половым путём.    Инфекция  имеет «космополитический»  характер, от  неё  страдают 170 миллионов  человек  на земном  шаре.

Это  широко распространённое паразитарное   заболевание,  вызываемое  Trichomonas  vaginalis  одинаково  часто поражающее,  как  мужчин,  так  и  женщин.   Урогенитальная   трихомонада  была впервые  описана  1863 году.   Парижский   врач  Допле   обнаружил  её в  выделениях  из  влагалища  больных  женщин  и  дал  ей название,  которым   пользуются и  по  настоящее время.  Трихомонады  выявляются у  10%  «здоровых» женщин  и  более чем  у  30% имеющих явные  клинические  проявления. В  тропических  странах  этот  показатель  изменяется от 15 до 40%  .Оценки  частоты пораженности   мужчин  в разных  странах  резко отличаются.  Так,  в докладе  Научной  группы ВОЗ отмечается,  что  трихомонады редко    бывают  причиной не гонококковых  уретритов.  В Польше  патология  составляет около  4%  всех НГУ  у  мужчин, в  Болгарии – 10%,  в странах  СНГ – от 23 до 47%.

Частота  инфицирования  трихомонозом клинически здоровых  женщин  в развитых  странах  составляет 2-10%. В США  ежегодно  регистрируют примерно 3 млн. новых случаев  заболевания  женщин (это приблизительно 2,4%). В России в1996 году  на  100 тыс. населения  зарегистрировано 399 (0,34%) случаев  заболевания[3,8]. 

Подробную  характеристику  заболеваемости  трихомонозом московской  популяции ввозрастной  группе  от  14до 59 лет мужчин  и  женщин дал  М.М. Васильев [9]. Среди  больных трихомонозом  и  смешанной гонорейно — трихомонадной инфекцией  подавляющее  число пациентов  были  незамужнем /неженаты  или разведены (практически 80%). Как правило, возраст  больных  трихомонозом и  смешанной  инфекцией женщин  колебался в  пределах 18-39 лет, мужчин –15- 39 лет. Последние  данные  подтверждают мировую  практику – болезньохватывает  население, ведущее  активную половую  жизнь. Заболеваниепротекало  с  минимальными клиническими  проявлениями, азачастую и без  них! Поэтому чащетрихомоноз  выявлялся при  профилактических  осмотрах и привлечении к  обследованиюполовых  партнёров. При  этом трихомонадное  носительствовыявлялось у 40- 50% больных смешанной  урогенитальной  инфекцией[4,11,12,28,40].

Учитываявсё  выше изложенное,  изменить  ситуацию в  лучшем  направлении, можно  разработав политику  проведения  массового   скрининга. А  это,  невозможно не имея доступных,  точных инадёжных  методов и  средств экспресс диагностики  трихомоноза.

Цельюнастоящей работы была оценка степени надёжности и эффективности методовлабораторной диагностики  трихомоноза. Атак же анализ статистических данных по выявлению трихомонозов, в Одесскомрегионе за период 1998-2003 годы.

1ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1<span Times New Roman"">                

Систематика и  биологические  особенности трихомонад

Возбудителемзаболевания является Trichomonasvaginalis, онотносится к  царству  высших протистов – Protozoa,классу   жгутиковых – Flagella, семейству — Trichomonadidae,  роду – Trichomonas.В организме человека  существует  три вида  трихомонад:  Trichomonastenax(elongata), Trichomonas  hominis  (abdominalis),Tricomonas  vaginalis. В ротовой  полости  чаще присутствует  Trichomonas tenax.  При диспепсических расстройствах,  обычно  у детей  выделяют  коменсал толстого  кишечника – Trichomonas hominis[24,27,31,32].

Возбудитель   имеет овально – грушевидную, продолговатую,  многоугольную  и другие  формы  в зависимости  от  встречаемых на  пути  препятствий. Размеры  трихомонад  колеблются от  8  до 40  мкм  и более.   Мелкие  особи  выявляются  при  остром, крупные  при  хроническом течении   процесса.   Снаружи возбудителя  имеется  тонкая оболочка -   перипласт,  снабженная в  передней  части тела  щелью – цистомой  крючкообразной   формы,  выполняющей   функцию  рта. Тело  трихомонад  состоит из  тонкозернистой   протоплазмы с  многочисленными   вакуолями.

В  передней части  тела  паразита  расположено   ядро  продолговато – овальной  формы,  круглой   или  грушевидной  формы,   содержащей  5 – 6 ядрышек.  Рядом  с ядром  находится   несколько  телец   в  виде  зерен,   называемых   блефоропластом,    от которого   начинается  прямая  осевая   нить   аксонем (аксостиль),  представляющая   собой упругий  тяж,   расположенный    внутри  протоплазмы   по  длинной  оси  и  выступающий наружу  в  виде шипа.  На  переднем конце  тела  трихомонады имеется  четыре  свободных  жгутика,   отходящих   от  блефаропласта.   Пятый   жгутик  идет  назад,   примерно до  трети   длины тела,   образуя   край  ундулирующей   мембраны,  сформированной   из перипласта.

Благодаря  движениям жгутиков  и  волнообразной (ундулирующей)  мембране   трихомонады  могут  активно   перемещаться.  Они способны  образовывать   псевдоподии, обеспечивающие  амебовидное   движение.  Высокая  пластичность  цитоплазмы позволяет   трихомонаде  внедряться  в  очень   узкие промежутки   между   клетками.  Поэтому   трихомонады  могут существовать   в  жгутиковой  и  амебовидной    форме,  при  которой   движения  жгутиков   не   видны.  Перемещение   возбудителя  происходит настолько   медленно,   что он   кажется   неподвижным.   В  такой   (неподвижной)  стадии  трихомонады   либо  совсем лишены   жгутиков,  либо прижимают  их  к телу,  вследствие  чего  их  нельзя  рассмотреть.

Электронно– микроскопически   подтверждено   существование    круглых неподвижных  форм  трихомонад,  лишенных   ядра  и жгутиков.  В  мочеиспускательном  канале у  мужчин  их содержится  меньше,   чем  у  женщин,   и они   малоподвижны.

Питается  трихомонада    эндоосмотически    и  путём  фагоцитоза.  Оптимальная   среда для  её  существования   рН 5,2 – 6,2.   Именно  поэтому   наиболее   благоприятные    условия  для   трихомонад  создаются  после    менструации.  Трихомонады  не  образуют  цисты   или   других   форм   устойчивости   обеспечивающих   им сохранение   вне   человеческого  организма.

Влагалищная  трихомонада   представляет  собой   самостоятельный  вид, в  естественных  условиях  обитает  только  в  мочеполовом  аппарате   человека   и   не   поражает  животных.   У  женщин местом  обитания   Trichomonas   vaginalis   является  влагалище,  у  мужчин – предстательная  железа и  семенные   пузырьки[35,39].

1.1.2<span Times New Roman"">        

Метаболизм T. Vaginalis

Несмотря  на то,  что  трихомонады по  многим  характеристикам  напоминают эукариоты,  они  отличаются по  энергетическому  метаболизму и  имеют  много общего  с  примитивными анаэробными  бактериями.  Трихомонады имеют  — гидрогеносомы,  окружённые двойной  мембраной,  которые являются  более  совершенными аналогами  митохондрий  и выполняют  схожие  метаболические  функции.

T. vaginalisдемонстрируетчерты,являющиеся общими  для всех  анаэробов в  отношении   углеводного и  энергетического  метаболизма, что  контролируется  ферментами, работающими,  как  в аэробных,  так  и в  анаэробных  условиях. Продукты  метаболизма  включают: ацетат,  лактат, малат,  глицерол,  СО2, а  в  анаэробных условиях  — водород.

T.vaginalis  — это облигатный паразит, потерявший способность самостоятельносинтезировать многие макромолекулы (пурины, пиримидины, липиды), поэтомуважнейшие питательные компоненты трихомонады получают из вагинального,уретрального секрета при фагоцитозе эпителия и бактериальных клеток из составасимбиотической и условно – патогенной микрофлоры мочеполовых путей.  Последнее обстоятельство  диктует  необходимость включения  в  культуральную среду для роста T. vaginalis  все  важнейшие макромолекулы,  витамины  и минералы. Для  репродукции  трихомонад особенно  важна  сыворотка крови,  содержащая  липиды, жирные  кислоты,  аминокислоты и  следы  металлов[9,19,22,33,47].

1.1.3  Культуральные   свойстватрихомонад

Трихомонады  хорошо  растут  в анаэробных   условиях,  оптимум их  роста  при  рНсреды  5,5 – 7,5  и температуре  35 – 37  градусов Цельсия.  Культура Trichomonas vaginalis   в  отличие от  других  культур трихомонад  не  способна к  гемолизу, плазмокоагуляции,  хорошо разлагает   глюкозу,мальтозу,  крахмал,  слабо – лактозу,  не образует  сероводорода  и индола.

Влагалищную трихомонаду   можно  культивировать  на питательных   средах,   на  клеточных  культурах  и  куриных   эмбрионах. Наиболее   пригодная  среда для  культивирования  — печёночная  среда   с   цистеином,   пептоном  и   мальтозой.  Культивируют   от 3 до 5  суток[37,39].

                   

1.2<span Times New Roman"">   

Устойчивость к  физическим,  химическим факторам

и  во  внешней среде

Вне  организма   человека трихомонада  быстро  теряет жизнеспособность.  В  течении нескольких  секунд  погибает от  высушивания,  при термической  обработке  в  диапазоне  до 55  градусов  Цельсия она  сохраняет  жизнеспособность  — 30 секунд. На  трихомонаду  губительно действуют  прямые  солнечные лучи.  При  исследовании секрета  простаты,  возбудитель гибнет (визуально теряет всякуюподвижность) за  время пока  мазок несут  к  микроскопу.

Среди  химических  веществ бактерицидно  действует  раствор ртути  дихлорида (1:1000 –1:1500), карболовой  кислоты (1%)  и хлорамин  Б  (1%).

Трихомонада остаётся  жизнеспособной  при температуре  -10 градусов Цельсия  до 22-45  минут,  при температуре 1-4 градуса Цельсия  в  течении 96-114 часов.  Возбудитель также  сохраняет  жизнеспособность  в некоторых  биологических  жидкостях и  выделениях  человека. В сперме и  моче трихомонады  жизнеспособны  до суток,  несколько  часов они  выживают  во влажном  чистом  белье[23,39].

1.2.1<span Times New Roman"">      

Условия инфицирования  трихомонадами

Источником инфекции  является  больной человек,  или  трихомонадоноситель. В неполовое  заражение встречается  редко,  преимущественно  у  девочек  (через мочалки,  ночные  горшки, латексные  перчатки, медицинские  инструменты).  Это возможно  благодаря  тому, что  в  комочках гноя  или  слизи урогенитальные  трихомонады  в течение   нескольких  часов сохраняют  жизнеспособность  (до  высыхания  субстрата или  до  полного перемешивания  его  с водой). Водный  путь  инфицирования отвергается,  хотя  допускается возможность  заражения  женщин при  совместном  приёме ванн,  со  слабо минерализованной  водой,  близкой к  изотоническому  раствору. В  акушерской  практике часто  происходит  инфицирование новорожденных  от   больных матерей.

Для детей  характерна  очаговость инфекции.  Такими  очагами могут  быть  семья, детский  коллектив.  Заражение происходит  при  непрямом  контакте. Однако  при  любом пути  передачи  источником является  больной  человек или  носитель  урогенитальных  трихомонад.

Вероятность  заражения во  время  полового акта,  превышает 80%. Причем  этот показатель  имеет  закономерность  с продолжительностью  коитуса,  и с  долей  морально гигиенических  аспектов.

Мужчины в  силу  анатомо-физиологических  особенностей риску  заражения  подвержены в  меньшей  степени, чем  женщины.  Однако у  60 – 80%  имевших половые  контакты  с больными  трихомонозом  женщинами паразиты  обнаруживаются. У  женщины, явившейся  источником  заражения мужчин  трихомонозом,  возбудитель выявляется в 100%  случаев.

В тех   случаях,  когда половой  акт  происходит с  использованием  барьерных  или  химических   методов  контрацепции,  случаев  заражения практически   не  отмечают. Некоторые  мужчины  после коитуса практикуют  метод   задержки мочи   в  уретре (путём пережимания  крайней  плоти), ошибочно  полагая  добиться трихомонацидного  эффекта.  Подобная практика  часто  приводит к  тому, что  трихомонады поражают   не  только уретру,  а  и дистальные  отделы   мочеполового тракта  мужчины.  Вероятность развития  простатита  в этих  случаях  намного выше,  чем  при обычном  течении  трихомоноза, когда  вначале  поражается только    уретра[9,13,14].

1.3<span Times New Roman"">                

Механизмы патогенеза  урогенитальной  инфекции 

трихомонадной  этиологии

Для трихомоноза  присущи  четыре фактора  патогенеза  такие,        как:интенсивность  инфекционного  воздействия, рН – влагалищного и других секретов,  физиологическое  состояние эпителия  мочеполовой  системы, сопутствующая  бактериальная  флора.

T.vaginalisвыделяет вовнешнюю среду  «клеточный разъединяющийфактор» рассматривающийся как средство, с помощью которого паразит проникает вмежклеточное пространство и, разрыхляя ткань, способствует проникновению всубэпителиальные слои бактерий, что в итоге формирует очаг воспаления. 

T.vaginalisспособна избегать литическогодействия комплемента и клеточно – опосредованных реакций иммунного ответахозяина, что является важнейшим аспектом патогенеза заболевания. 

Устойчивость   влагалищных трихомонад  к  комплементу зависит  от  высокой концентрации  в  них ионов  железа,  которые паразит  в  избытке способен  получать  из менструальной  крови.  Известно, что  ионы  железа регулируют  экспрессию  протеазных белков,  которые  способствуют разрушению  С3 – компонента  комплемента на  поверхностимикроорганизма,  и  позволяют паразиту  избегать  комплемент – зависимого  лизиса. Необходимо  учитывать,  что влагалищные  трихомонады,  подобно другим  паразитам,  секретируют высокоимуногенные  антигены,  которые способны  нейтрализовать  антитела или  цитотоксические  антигены, которые  способны  нейтрализовать  антитела или  цитотоксические  Т – лимфоциты.  Кроме того,  T.vaginalis   может сорбировать   на  своей поверхности  белки  плазмы (антигенная  мимикрия),  что не  позволяет  иммунной системе  идентифицировать  паразита, как  чужеродный  организм.

Таким  образом,   показано, что  трихомонадная  инфекция не  приводит  к развитию  выраженного  иммунного  ответа.  Выявление  у больных  или  переболевших трихомонозом   лиц  сывороточных и  секреторных   антител  является   лишь  свидетельством  существующей  или  перенесенной  инфекции, но  не  способностью обеспечить   стойкий  иммунитет.  Реинфекция  T.vaginalis  у  человека не  вызывает  иммунной  защиты.     Клинические  проявления урогенитального  трихомоноза   отличаются большим  разнообразием:  от острых  форм  с ярко  выраженными   симптомами воспаления   до  мало и  асимптомного  течения заболевания.  Патогномоничных  клинических (субъективных  и  объективных) признаков  трихомоноза  нет, также  не  обнаружены специфические морфологические  изменения  в пораженных  органах  и тканях.  Определяющую  роль  в  патогенезе  T.vaginalis играет  формирование  различных ассоциаций   влагалищной  трихомонады с  патогенными  и условно – патогенными микроорганизмами урогенитального    тракта,  а также  ответной   реакции макроорганизма.  Если  сила ответной  реакции  макроорганизма   превышает «агрессивность»  инфекционного  агента, то  клиника  острого воспаления,   как  правило, не  развивается,  а напротив, слабый  иммунный  ответ  способствует  реализации    патогенных и  вирулентных  свойств возбудителя. 

T.vaginalis,попадая в уретру,фиксируется на клетках плоского эпителия слизистой оболочки, проникая в железымочеиспускательного канала и лакуны. Попав  в  мочеполовые органы,  она  обуславливает развитие  воспаления  или остаётся  незамеченной.Умерено  выраженная  воспалительная  реакция развивается  при  наличии большого  количества  паразитов[1,2,3,6,9,13,15]. 

 

1.3.1  Клиника  трихомоноза  у мужчин

У   мужчин  трихомонады могут  поражать  уретру, её  железы,  семенные пузырьки,  простату,  придатки яичка,  куперовы  железы, пара уретральные  протоки,  железы крайней  плоти,  мочевой пузырь,  почечные  лоханки.

Уретрит – наиболее частое  поражение. Различают  свежий и  хронический.  Течение свежего уретрита  чаще  подострое и  торпидное,  реже острое.  При  остром и  подостром  течении уретрита  наблюдаются  обильные гнойные  выделения  из уретры,  при  торпидном течении – скудные, водянистые,  слизисто  гнойные или  слизистые.  У некоторых больных  выделения  пенистые. Субъективные  ощущения непостоянны и  обычно  маловыражены: част  это зуд  и  жжение в  мочеиспускательном  канале; иногда  может  возникать боль  во  время мочеиспускания. Диуретические  расстройства  выражены слабо.

Обильные выделения  при  острой и  подострой  формах уретрита  за  1 – 2 недели,  самопроизвольно  уменьшаются, и  заболевание  становится малосимптомным.  У части  больных уретрит  начинается  с  нерезко  выраженных  явлений, но  затем  постепенно усиливается,  приобретая  острый и  подострый  характер.

Хронические уретриты  отличаются  вялым течением  с  периодическим обострением  патологического  процесса. У  63%  больных заболевание  характеризуется  малосимптомностью,  скудными гнойными  выделениями  или слизисто – гнойными  выделениями,  у 37%  преобладают  симптомы осложнений,  а  уретрит остаётся  незамеченным  больными.

Воспалительный  процесснедолго  ограничивается  передней уретрой.   Довольно  скоро развивается  тотальный  уретрит. Учащённое   мочеиспускание,  императивные позывы,  боли  в конце  мочеиспускания,  пиурия,  терминальная  гемотурия  наблюдаются только  при  остром течении.  В  торпидных случаях  клинические  признаки заднего  уретрита  отсутствуют.  Он  обычно  распознаётся по  патологическому  составу второй  порции  мочи  и  данным  уретроскопии.

Изменения, выявленные   при  уретроскопии у  мужчин,  страдающих трихомонозом,  мало,  чем отличаются  от  эндоскопической  картины при  гонорейном  уретрите. 

Простатит,   возникает  в  у 10,6 – 27,8%  больных. Возможно,  установить  только после  взятия  секрета железы.

Эпидимит, встречается чаще, чем  при  гонорее, носит  всегда  односторонний характер.  У  30% теч

еще рефераты
Еще работы по медицине