Реферат: Клонирование и анализ генов легких цепей иммуноглобулинов стерляди

ÎÃËÀÂËÅÍÈÅ

ÑÏÈÑÎÊÑÎÊÐÀÙÅÍÈÉ

..............................................................................................3

ÂÂÅÄÅÍÈÅ

.............................................................................................................................4

ÎÁÇÎÐËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ

......................................................................................................5

ÑÒÐÎÅÍÈÅÈÌÌÓÍÎÃËÎÁÓËÈÍÎÂ...................................................................................

5

ÃÅÍÎÌÍÀßÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈßÈÝÊÑÏÐÅÑÑÈß

ÃÅÍÎÂL-ÖÅÏÅÉ ÈÃ ÓÌËÅÊÎÏÈÒÀÞÙÈÕ....................................................................

7

ÃÅÍÎÌÍÀßÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈßÈÝÊÑÏÐÅÑÑÈß

ÃÅÍÎÂL-ÖÅÏÅÉ ÈÃ ÓÍÈÇØÈÕÏÎÇÂÎÍÎ×ÍÛÕ......................................................

11

ÝÂÎËÞÖÈßÃÅÍÎÂ L-ÖÅÏÅÉÈÃ.......................................................................................

19

ÌÀÒÅÐÈÀËÛÈ ÌÅÒÎÄÛ

...........................................................................................24

ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇÄÍÊ............................................................................................................

24

ÂÛÄÅËÅÍÈÅÄÍÊ ÈÇÃÅËß.................................................................................................

24

ÏÎËÓ×ÅÍÈÅÐÀÄÈÎÀÊÒÈÂÍÛÕÇÎÍÄÎÂ......................................................................

25

ÂÛÄÅËÅÍÈÅÏËÀÇÌÈÄÍÎÉÄÍÊ......................................................................................

26

Î×ÈÑÒÊÀÏËÀÇÌÈÄÍÎÉÄÍÊ ÌÅÒÎÄÎÌÐÀÂÍÎÂÅÑÍÎÃÎ

ÖÅÍÒÐÈÔÓÃÈÐÎÂÀÍÈßÂ ÃÐÀÄÈÅÍÒÅÏËÎÒÍÎÑÒÈCsCl........................................

26

ÒÐÀÍÑÔÎÐÌÀÖÈßÏÐÎÊÀÐÈÎÒÈ×ÅÑÊÈÕÊËÅÒÎÊ...................................................

27

ÂÛÄÅËÅÍÈÅËÅÉÊÎÖÈÒÎÂÈÇ ÊÐÎÂÈÐÛÁ.................................................................

28

ÂÛÄÅËÅÍÈÅÑÓÌÌÀÐÍÎÉÐÍÊ ÈÇËÅÉÊÎÖÈÒÎÂ.....................................................

28

ÂÛÄÅËÅÍÈÅÂÛÑÎÊÎÌÎËÅÊÓËßÐÍÎÉÄÍÊ

ÈÇÝÓÊÀÐÈÎÒÈ×ÅÑÊÈÕÊËÅÒÎÊ.....................................................................................

28

ÊÎÍÑÒÐÓÈÐÎÂÀÍÈÅÁÈÁËÈÎÒÅÊÈêÄÍÊ......................................................................

29

ÏÎËÈÌÅÐÀÇÍÀßÖÅÏÍÀßÐÅÀÊÖÈß...............................................................................

33

ÑÓÁÊËÎÍÈÐÎÂÀÍÈÅÄÍÊ...................................................................................................

34

ÑÊÐÈÍÈÍÃÁÈÁËÈÎÒÅÊÈêÄÍÊ........................................................................................

34

ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅÍÓÊËÅÎÒÈÄÍÎÉÏÎÑËÅÄÎÂÀÒÅËÜÍÎÑÒÈÄÍÊ.............................

35

ÑÀÓÇÅÐÍÁËÎÒÃÈÁÐÈÄÈÇÀÖÈß....................................................................................

.36

ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ

.....................................................................................................................38

ÊÎÍÑÒÐÓÈÐÎÂÀÍÈÅÁÈÁËÈÎÒÅÊÈêÄÍÊ È ÅÅÑÊÐÈÍÈÍÃ.....................................

38

ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅÏÅÐÂÈ×ÍÎÉÑÒÐÓÊÒÓÐÛ......................................................................

40

ÑÐÀÂÍÈÒÅËÜÍÛÉÀÍÀËÈÇÏÅÐÂÈ×ÍÎÉÑÒÐÓÊÒÓÐÛ.............................................

.40

ÀÍÀËÈÇÃÅÍÎÌÍÎÉÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈÈ..............................................................................

41

ÎÁÑÓÆÄÅÍÈÅ

....................................................................................................................46

ÂÛÂÎÄÛ

...............................................................................................................................48

ÑÏÈÑÎÊËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ

................................................................................................49

ÑÏÈÑÎÊÑÎÊÐÀÙÅÍÈÉ

ÈÃ èììóíîãëîáóëèíû

ïí ïàðíóêëåîòèäîâ

òïí òûñÿ÷ ïàðíóêëåîòèäîâ

å.à. åäèíèöààêòèâíîñòè

ÈÏÒÃ èçîïðîïèëòèîãàëàêòîçèä

ÒÅÌÅÄ N,N,N,'N'-òåòðàìåòèë-ýòèëåí-äèàìèí

òðèñ òðèñ(ãèäðîêñèìåòèë)àìèíîìåòàí

äÍTÔ äåçîêñèàäåíîçèíòðèôîñôàò

ääÍÒÔ äèäåçîêñèíåêëåîòèäòðèôîñôàò

äÍÒÔ äåçîêñèíóêëåîòèäòðèôîñôàò

ðATÔ ðèáîàäåíîçèíòðèôîñôàò

ÄÒÒ äèòèîòðåéòîë

Na2ÝÄÒÀ ýòèëåíäèàìèíòåòðààöåòàòíàòðèÿ

SDS äîäåöèëñóëüôàòíàòðèÿ

X-Gal 5-áðîìî-4-õëîðî-3-èíäîëèë-áåòà-D-ãàëàêòîçèä

ÂÂÅÄÅÍÈÅ

Âîñíîâåôóíêöèîíèðîâàíèÿãóìîðàëüíîãîèììóíèòåòàóìëåêîïèòàþùèõëåæèò ñëîæíûéêîìïëåêñìîëåêóëÿðíî-ãåíåòè÷åñêèõèôèçèîëîãè÷åñêèõìåõàíèçìîâ,îáåñïå÷èâàþùèõðåîðãàíèçàöèþ,ìóòàãåíåç èêëîíàëüíóþýêñïðåññèþãåíîâèììóíîãëîáóëèíîâ.Âîçíèêíîâåíèåýòîéïîäñèñòåìûèììóíèòåòàñâÿçûâàþò ñïîÿâëåíèåìõðÿùåâûõ ðûá.

Íàðàííèõýòàïàõýâîëþöèèãåíû ÈÃ áûëèîðãàíèçîâàíûâ âèäåïîâòîðÿþùèõñÿêëàñòåðîâ V-J-Cãåííûõñåãìåíòîâ.Ïðè ïîäîáíîéîðãàíèçàöèèðàçíîîáðàçèåïðîäóöèðóåìûõàíòèòåëîñíîâûâàëîñü,ïðåæäå âñåãî,íàêîëè÷åñòâåèìåâøèõñÿ âãåíîìåêëàñòåðîâ,êàæäûé èçêîòîðûõêîäèðîâàëîäèíâàðèàíòïîëèïåïòèäíûõñóáúåäèíèöÈÃ. Â õîäåäàëüíåéøåéýâîëþöèèïðîèçîøåëïåðåõîä îòêëàñòåðíîéêñåãìåíòàðíîéîðãàíèçàöèè,îáåñïå÷èâàþùåéäîïîëíèòåëüíûéèñòî÷íèêðàçíîîáðàçèÿçà ñ÷åò êîìáèíàòèâíîéðåêîìáèíàöèèãåííûõ ñåãìåíòîâ.Ïðåäïîëàãàåòñÿ,÷òî ýòîòïåðåõîä òàêæåèìåë âàæíîåçíà÷åíèåäëÿ ðåãóëÿöèèýêñïðåññèèãåíîâ èîñóùåñòâëåíèÿìåõàíèçìîâêëîíàëüíîãîîòáîðààíòèòåëîïðîäóöèðóþùèõêëåòîê â õîäåèììóííîãîîòâåòà.

Íàñòîÿùàÿðàáîòàïðåäñòàâëÿåòñîáîé ÷àñòüïðîåêòà,íàïðàâëåííîãîíà èçó÷åíèåýâîëþöèèìåõàíèçìîâèçîòèïè÷åñêîãîèñêëþ÷åíèÿãåíîâëåãêèõ öåïåéÈÃ ó íèçøèõïîçâîíî÷íûõ.Öåëÿìèðàáîòûÿâëÿëèñüèçó÷åíèåñòðóêòóðû èîðãàíèçàöèèãåíîâ ëåãêèõöåïåé ÈÃñòåðëÿäè (Acipenser ruthenus),ïðåäñòàâèòåëÿôèëîãåíåòè÷åñêèäðåâíåéãðóïïûêîñòíî-õðÿùåâûõðûá.

ÎÁÇÎÐËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ

ÑÒÐÎÅÍÈÅÈÌÌÓÍÎÃËÎÁÓËÈÍÎÂ

Èììóíîãëîáóëèíûâûïîëíÿþò âîðãàíèçìå ïîçâîíî÷íûõôóíêöèþãóìîðàëüíûõàíòèòåë èàíòèãåí-ñâÿçûâàþùèõðåöåïòîðîâÂ-ëèìôîöèòîâ.Îñîáåííîñòüþýòîãîêëàññàáåëêîâ ÿâëÿåòñÿîãðîìíîåðàçíîîáðàçèå,ïîçâîëÿþùååèì âñòóïàòüâîâçàèìîäåéñòâèåñ ôàêòè÷åñêèëþáûìèáèîëîãè÷åñêèìèìàêðîìîëåêóëàìè.

Òèïè÷íàÿìîëåêóëà ÈÃñîñòîèò èçäâóõ èäåíòè÷íûõòÿæåëûõ (H) èäâóõèäåíòè÷íûõëåãêèõ (L)ïîëèïåïòèäíûõöåïåé. H- è L-öåïèïîñòðîåíûèçíåñêîëüêèõäîìåíîâ,êàæäûé èçêîòîðûõñîñòîèòïðèìåðíî èç 110àìèíîêèñëîòíûõîñòàòêîâ. Óìëåêîïèòàþùèõñóùåñòâóåòïÿòü êëàññîâH-öåïåé:

g,m, a,d,è e.Êàæäàÿ H-öåïüïîñòðîåíàèç îäíîãîN-êîíöåâîãî èíåñêîëüêèõ (òðåõèëè ÷åòûðåõ)C-êîíöåâûõäîìåíîâ.N-êîíöåâûåäîìåíûðàçëè÷àþòñÿâ ðàçíûõìîëåêóëàõ èíàçûâàþòñÿâàðèàáåëüíûìè(V) äîìåíàìè.C-êîíöåâûåäîìåíûèìåþòîäèíàêîâóþñòðóêòóðó óìîëåêóëîäíîãîêëàññà èíàçûâàþòñÿêîíñòàíòíûìè(Ñ) äîìåíàìè(ðèñ. 1) (Ïîë, 1987).

ÑðåäèL-öåïåéìëåêîïèòàþùèõðàçëè÷àþòäâà òèïà:ëÿìáäà èêàïïà. ÊàæäàÿL-öåïü ñîñòîèòèç îäíîãîâàðèàáåëüíîãîè îäíîãîêîíñòàíòíîãîäîìåíîâ. Âèíäèâèäóàëüíîéìîëåêóëå ÈÃïðèñóòñòâóåòòîëüêî îäèíòèï L-öåïè (Roitt et al., 1993).

ÃèãàíòñêîåðàçíîîáðàçèåÈÃîáåñïå÷èâàåòñÿïðåæäå âñåãîòåì, ÷òî V è Cîáëàñòèêîäèðóþòñÿðàçíûìèãåíàìè (ãåííûìèñåãìåíòàìè),ôèçè÷åñêèðàçíåñåííûìèâçàðîäûøåâîéÄÍÊ.

Âôîðìèðîâàíèèâàðèàáåëüíûõäîìåíîâ H-öåïåéó÷àñòâóþòòðè ãåííûõñåãìåíòà:âàðèàáåëüíûé(V), D-ñåãìåíò (îòàíãë. diversity-ðàçíîîáðàçèå)è J-ñåãìåíò(îò àíãë. joining-ñîåäèíÿþùèé).Ñ-îáëàñòèÍ-öåïåéðàçíûõêëàññîâêîäèðóþòñÿ îòäåëüíûìèãåíàìè (Roitt et al., 1993).

ÑH1

ÑH2

ÑH3

H-öåïü

L-öåïü

ÑL

Ðèñ. 1.Ñõåìàñòðîåíèÿìîëåêóëûèììóíîãëîáóëèíà.

Òèïè÷íàÿìîëåêóëàèììóíîãëîáóëèíàñîäåðæèò äâåèäåíòè÷íûåëåãêèå (L) è äâåèäåíòè÷íûåòÿæåëûå (H)öåïè,ñâÿçàííûåìåæäó ñîáîéêîâàëåíòíîäèñóëüôèäíûìèñâÿçÿìè. ÊàæäàÿL-öåïüñîñòîèò èçîäíîãîâàðèàáåëüíîãî(

VL)è îäíîãîêîíñòàíòíîãî(ÑL)äîìåíà.Í-öåïüñîñòîèò èçîäíîãî VH èíåñêîëüêèõ CÍäîìåíîâ.

Âôîðìèðîâàíèèçðåëîãîãåíà L-öåïèó÷àñòâóþòòðè ãåííûõñåãìåíòà:V-ñåãìåíò èJ-ñåãìåíòêîäèðóþòV-äîìåí,C-ñåãìåíòêîäèðóåò êîíñòàíòíûéäîìåí. Íàïîçäíèõñòàäèÿõ ðàçâèòèÿÂ-ëèìôîöèòàãåííûåñåãìåíòû,êîäèðóþùèåâàðèàáåëüíûåäîìåíû,îáúåäèíÿþòñÿâ ðàçëè÷íûõñî÷åòàíèÿõ,îáðàçóÿìàòðèöó äëÿýêñïðåññèè L-è H-öåïåé (Seidman et al., 1979; Durdik etal., 1984).

ÃÅÍÎÌÍÀßÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈßÈÝÊÑÏÐÅÑÑÈßÃÅÍÎÂ L-ÖÅÏÅÉÈÃ ÓÌËÅÊÎÏÈÒÀÞÙÈÕ

Ðàçëè÷íûåâèäûìëåêîïèòàþùèõèìåþò ñõîäíóþñõåìóîðãàíèçàöèèèýêñïðåññèèãåíîâ ÈÃ.Îäíèì èçíàèáîëååèçó÷åííûõ âýòîìîòíîøåíèèâèäîâÿâëÿåòñÿ÷åëîâåê. Ëÿìáäàè êàïïà öåïèÈÃ ó÷åëîâåêàêîäèðóþòñÿ ãåíàìè,ðàñïîëîæåíûìèâ ðàçíûõëîêóñàõ è íàðàçíûõõðîìîñîìàõ.Êàïïà ëîêóññîñòîèò èçáîëüøîãîêîëè÷åñòâà V

kãåííûõñåãìåíòîâ,ñîáðàíûõ âãðóïïû, ïÿòè Jkè îäíîãî Ñkñåãìåíòà…Òàêîé òèïîðãàíèçàöèèíàçûâàåòñÿñåãìåíòàðíûì(ðèñ. 2). Ëÿìáäàëîêóñ ñîñòîèòèç ãðóïïû Vlñåãìåíòîâ,òî÷íîåêîëè÷åñòâîêîòîðûõ íåèçâåñòíî,è ñåìè ïàð Jl-Clñåãìåíòîâ.Òðè èç íèõ (JCl4- JCl6)ÿâëÿþòñÿïñåâäîãåíàìè(Hieter et al., 1981; Roitt et al., 1993).

ÂïðîöåññåðàçâèòèÿÂ-ëèìôîöèòàâ êðîâåòâîðíûõîðãàíàõ îäèíèç Vñåãìåíòîâ ñîåäèíÿåòñÿñ îäíèì èç Jñåãìåíòîâïîñðåäñòâîìñàéòñïåöèôè÷åñêîéðåêîìáèíàöèè(Schatz et al., 1992). Â ýòîòïðîöåññâîâëåêàþòñÿñïåöèàëüíûå îëèãîìåðíûåïîñëåäîâàòåëüíîñòè:ãåïòà- èíîíàìåðû,ôëàíêèðóþùèåñ 3' ñòîðîíû Vñåãìåíò è ñ 5'ñòîðîíû Jñåãìåíò (ðèñ.3) (Aguilera et al., 1987; Hesse et al., 1989). Îòëè÷èòåëüíîéîñîáåííîñòüþëÿìáäà èêàïïà ëîêóñîâÿâëÿåòñÿêîíôèãóðàöèÿïðîìåæóòêîâìåæäó ãåïòà-èíîíàìåðàìè,íàçûâàåìûõ ñïåéñåðàìè.Ñ V è J ãåííûìèñåãìåíòàìèëÿìáäà òèïààññîöèèðîâàíû23 ïí è 12 ïíñïåéñåðû ñîîòâåòñòâåííî,à ñ V è Jñåãìåíòàìèêàïïà òèïà — 12ïí è 23 ïíñïåéñåðû (Durdik et al., 1984;Stavnezer et al., 1985).

JCl

1 JCl2 JCl3 JCl4 JCl5 JCl

6 JCl7 <div v:shape="_x0000_s1369">

l

òèï <div v:shape="_x0000_s1189">

Vl

1 Vl2 Vln <img src="/cache/referats/5086/image003.gif" v:shapes="_x0000_s1195">

ë

Y

ãåíû

3’

Vk

1 Vk2 Vkn Jk1 — Jk5 Ck

k

òèï <div v:shape="_x0000_s1359">

5’

3’

5’

<img src="/cache/referats/5086/image007.gif" v:shapes="_x0000_s1434"><img src="/cache/referats/5086/image008.gif" v:shapes="_x0000_s1063"><img src="/cache/referats/5086/image009.gif" v:shapes="_x0000_s1437"><img src="/cache/referats/5086/image010.gif" v:shapes="_x0000_s1077"><img src="/cache/referats/5086/image011.gif" v:shapes="_x0000_s1443"><img src="/cache/referats/5086/image012.gif" v:shapes="_x0000_s1440"><img src="/cache/referats/5086/image013.gif" v:shapes="_x0000_s1446"><img src="/cache/referats/5086/image014.gif" v:shapes="_x0000_s1431"><img src="/cache/referats/5086/image015.gif" v:shapes="_x0000_s1102"><img src="/cache/referats/5086/image007.gif" v:shapes="_x0000_s1425"><img src="/cache/referats/5086/image016.gif" v:shapes="_x0000_s1114"><img src="/cache/referats/5086/image008.gif" v:shapes="_x0000_s1128"><img src="/cache/referats/5086/image008.gif" v:shapes="_x0000_s1145"><img src="/cache/referats/5086/image009.gif" v:shapes="_x0000_s1428"><img src="/cache/referats/5086/image015.gif" v:shapes="_x0000_s1158"><img src="/cache/referats/5086/image009.gif" v:shapes="_x0000_s1423"><img src="/cache/referats/5086/image017.gif" v:shapes="_x0000_s1178"><img src="/cache/referats/5086/image018.gif" v:shapes="_x0000_s1183"><span

еще рефераты

Еще работы по биологии

Реферат по биологии

Влияние цитокинина на рост и развитие проростков пшеницы в зависимости от условий минерального питания

9 Июня 2015

Реферат по биологии

Нодальная анатомия некоторых представителей семейства Campanulaceae Juss

9 Июня 2015

Реферат по биологии

Общее содержание воды в листьях калины в условиях биостанции

9 Июня 2015

Реферат по биологии

Влияние циано- и тетразольных производных цитозина и тимина на резистентность эритроцитов

9 Июня 2015